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          Favorgen下FavorPrep™ Tri-RNA 試劑的操作使用

          發(fā)布時間: 2021-07-07  點擊次數(shù): 1561次

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          FavorPrep™ Tri-RNA 試劑

           

          FavorPrep™ Tri-RNAReagent 是一種來自改進的苯酚和異硫氰酸胍 (GSN) 方法的試劑,用于單步 RNA 分離。在樣品勻漿或裂解過程中,Tri-RNA 試劑保持 RNA 的完整性,同時破壞細胞和溶解細胞成分。 Tri-RNA 試劑的組成包括苯酚和 GSN 的單相溶液。生物樣品在 Tri-RNA 試劑中勻漿或裂解,勻漿通過添加氯仿、渦旋和離心分離成水相和有機相。 RNA 僅保留在水相中(透明的上相),DNA 保留在中間相中,蛋白質(zhì)保留在有機相中(紅色)。通過加入異丙醇從水相中沉淀 RNA 并溶解/濃縮。如果需要,可以分別用乙醇和異丙醇從中間相和有機相中依次沉淀 DNA 和蛋白質(zhì),然后溶解/濃縮。

           

          特征

           

          ★ 一步法從組織、細胞、細菌、植物、酵母和生物體液中分離總RNA

           

          ★ 整個RNA分離過程不到1小時。

           

          ★ 純化后的RNA可應(yīng)用于:RT-PCRNorthern雜交、RNase保護、Poly-A+RNA篩選、差異展示和微陣列分析。應(yīng)用

           

          100 次使用 儲存: 4℃ 棕色玻璃瓶中,供日常使用

           

          程序:

           

          1. 1 ml Tri-RNA Reagent 加入 100 mg 組織(或從最多 10 ml 血液或 106 個培養(yǎng)細胞中沉淀的血液 RNA 病毒,或 10 cm2 培養(yǎng)板)

          2. Tri-RNA Reagent 中使用玻璃 Teflon Polytron 勻漿器勻漿組織樣品(培養(yǎng)細胞可以通過重復(fù)移液裂解;濃縮的血液 RNA 病毒可以通過劇烈渦旋裂解)。

          3. 將勻漿在室溫下放置 5 分鐘。

          4. 加入 0.2 ml 氯仿(未提供)并劇烈混合。

          5. 12,000 rpm 離心 3 分鐘以分離各相,RNA 在透明的上層水相中。

          6. RNA 相轉(zhuǎn)移到干凈的管中。

          7. 加入 1x 體積的異丙醇,渦旋以沉淀 RNA,在室溫下放置 10 分鐘,然后以 12,000 rpm 離心 15 分鐘。

          8. 去除上清液。

          9. 0.5 ml 冰冷的 70% 乙醇清洗 RNA 沉淀,12,000 rpm 離心 1 分鐘,小心除去上清液。

          10. 短暫旋轉(zhuǎn)以確保 RNA 沉淀沉淀到管的側(cè)壁,然后小心地去除任何殘留的上清液,不要接觸 RNA 沉淀。

          11. RNA 重懸在少量 TEpH8.0

           

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